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X-Green II dsDNA Quantitation Kit
  • 产品货号:
    DE-X2033
  • 中文名称:
    X-Green II dsDNA Quantitation Kit
  • 品牌:
    BIODEE
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • DE-X2033-2000T

    2000T

    ¥6200.00

    分子诊断试剂盒 U

产品描述

产品名称: X-Green II dsDNA Quantitation Kit 

产品货号: DE-X2033 

产品规格: 2000T 

检测仪器:与大多数荧光酶标仪、荧光计兼容

产品内容

                   blob.png

储存条件:4℃避光保存,推荐条件下可储存 6 个月。对于长期储存,20× Buffer 和 dsDNA 标准液可以储存在≤-20oC。

产品参数:Ex/Em: 480/520 nm(结合 dsDNA)

产品介绍:

  X-Green II 是荧光检测dsDNA 并进行定量的一种产 品,这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术:cDNA 文 库的构建、亚克隆的DNA 片段纯化及应用,比如进行DNA 定量、产物扩增和引物的进一步检测。常规的DNA含量的 检测方法是在260nm 处测其吸光值。这种方法的主要缺点 是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大,并?#19968;?#20250; 受到核酸制备过程中污染物的干扰,无法区分DNA 和RNA, 而且这种方法不灵敏(5 μg/mL dsDNA溶液A260=0.1)。 X-Green II 定量检测方法简单、方便,成为生物制品残留 DNA检测的标准。

 X-Green II 只有与dsDNA 结合后才发出荧光,并且所发荧光强度与 DNA 浓度成正比 。 X-Green II dsDNA Quantitstion Kit 可以检测出25pg/mL - 1000ng/Ml ?#27573;?#20869;的 dsDNA,且线性关?#21040;?#22909;(R 2>0.99)。

实验步骤

试剂制备

  X-Green II dsDNA 定量试剂是以1 mL 的浓缩?#30418;?#24335;保存在有机溶剂中。实验?#20445;?#37197;制操作溶液:2× X-Green II 试剂,将组分A用1×Buffer(组分B稀释20倍)按1:200的比 例稀释。对于终体积为2 mL 的检测体系,如果要准备足 够的操作溶液测定20 个样品,可在20 mL 1×Buffer中加入 100 μL 组分A;对于终体积为200 μL的检测体系,如果要 准备足够的操作溶液测定20个样品,可在2 mL 1× Buffer 中加入10 μL组分B。由于试剂容易吸附到玻璃表面,要在塑料容器中配制。组分A试剂见光易?#21040;猓?#22240;此要注意避光保存。

 溶液最好在配制好的数小时内使用,以保证最佳的实验结果。

实验方法

1. 将试剂盒中提供的组分 B 储备液稀释成 1× Buffer,如制 备 50 mL 1× Buffer,需要将 2.5 mL 组分 B 加入到 47.5mL 无菌水中。

2. 稀释 DNA 标准品,制作标准曲线。用 1× Buffer 稀释组 分 C 100 μg/ mL 至 2 μg/ mL。 如取 40μL 组分 C,加入 1.96mL 无菌水即可。对于低浓度的标准曲线,可以把 2 μg/mL 的 DNA 标准品稀释 40 倍,制备 50ng/mL 的 DNA 储 液,然后再进一步稀释。具体稀释方法可参照表 1、表 2。

                                                                       表 1. 宽线度标准曲线制备

                                     blob.png

                                                                   表2. 低浓度标准曲线制备

                                     blob.png 

3. 对于每个未知样品,将1-10 μL 样品与99-90 μL 1× Buffer 混合,混匀,加入微孔板孔中检测。

4. 用1× Buffer 按照1:200 稀释组分A,制备2× X-Green II 工作液。对于每个标准品和每个未知样品,都需要100 μL的 体积。确定要测试的样品和未知样品的总数,并将该数值乘 以100 μL,即为所需稀释的X-Green II 试剂的总体积。 X-Green II 对光敏感,融化和稀释时要注意避光操作。

5. 添加100 μL 稀释的X-Green II 工作液到每个标准和样 品孔。吹吸三次混?#21462;?/span>

6. 用锡箔纸覆盖微板,并在室温下孵育5 min。

7. 读取数据,取平均值生成标准曲线,并确定未知样品中 DNA 的浓度。

注意事项:

1. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧 光淬灭。

2. X-Green II 工作液最好现配现用,以保证最佳结果。

3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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