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WonderBlue? Broad Range dsDNA Quantitation Kit
  • 产品货号:
    DE-W2010
  • 中文名称:
    WonderBlue? Broad Range dsDNA Quantitation Kit
  • 品牌:
    BIODEE
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • DE-W2010-200T

    200T

    ¥600.00

    分子诊断试剂盒 U

  • DE-W2010-1000T

    1000T

    ¥2400.00

    分子诊断试剂盒 U

产品描述

产品名称:WonderBlue? Broad Range dsDNA Quantitation Kits 

产品货号:DE-W2010 

产品规格:200T,1000T

产品内容:

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储存条件:4℃ 避光保存,推荐条件下可储存 6 个月

产品参数:Ex/Em: 350/460 nm (结合 dsDNA)

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            图 1. 在 dsDNA 过饱和的条件下,WonderBlue?的激发与发射光谱图。

产品介绍:WonderBlue? dsDNA 定量试剂盒(WonderBlue? Broad Range dsDNA Quantitation Kits)可以在 200 μL 体系内定量 2-2000 ng 的 dsDNA。不同于常规的基于吸光度的测量,这款试剂盒可以区分 dsDNA、ssDNA 或 RNA,有选择性地检测 dsDNA(见图 2)。与传统 DNA 定量方法相比,该产品具有检测范围广、高灵敏度、高特异性等优点。试剂盒主要 包含 WonderBlue? Broad Range dsDNA Quantitation Buffer, Dye solution, Enhancer solution 以及 pre-diluted dsDNA Standards 四个组分。此外,试剂盒还可以将其他污染物的 影响降低至最低,可以耐受常规污染物例如蛋白质,盐,有机溶剂和洗涤剂等。

使用方法

1.为了得到最佳结果,请使用精确校准的移液器和去 RNA 酶的枪头、试管以及检测板。建议检测时每个 DNA 标样和未知样品都设定 3 个复孔。如果检测时不只一块 96 孔板, 建议每块 96 孔板都设定一条标准曲线,尽量减少检测板之间的误差。

2.使?#20204;埃?#23558;产品从储存条件下取出恢复至室温。其中 WonderBlue? Broad Range dye 提供的是 DMSO 溶液,在 4 ℃ 存放时成固体,可 37 ℃水浴溶解。每个组分应充分震荡或涡旋混?#21462;?#31163;心,以免造成不必要的试剂损耗。

3.每个待测样品对应 200 μL 的 WonderBlue?工作液。为得到最佳结果,工作液应在一小时内使用完毕。如果将工作液重新储存并在 24 小时内使用,结果的准确性会有轻微损失。

  储存过程中,染料可能会出现沉淀现象,可以通过涡旋震?#35789;?#20854;重悬。与染料配合使用的其他试剂如表 1 所示,使?#20204;?#35831;充分混?#21462;?/span>

                                                          表 1. 20 mL WonderBlue? Broad Range 工作液 

                                                                      (具体规格按实际需求略作调整)

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4.对于每个样品,吸取 200 μL 的工作液至黑色的 96 孔板 微孔中。为确保结果精确可靠,建议每个测试样品和 DNA 标   样分别做平行的 3 个复孔,此过程?#37096;?#20197;使用有精确量程 的移?#21495;?#26538;进?#23567;?#40657;色的检测板可以减少各测试样品间的荧   光干扰。

5.在 96 孔板微孔中,加入 10 μL 的 dsDNA 标样或 1-20 μL 未知样品,并用移液器轻轻混?#21462;?/span>

6.将微孔板室温避光孵育 10 min,为得到最佳结果,检测 板应在一小时内读取完毕。如果将?#20174;?#28082;重新储存并在 24 h   内读取数据,结果的精确性会有轻微损失。

7.使用激发波长和发射波长在 350 nm 和 460 nm 处的酶标 仪测量荧光值。

8.?#35889;?#19968;条标准曲线,计算检测样品的 DNA 浓度(见图 3)。 注:图 3 标准曲线仅供参考,您可以根据实际测得的数   据自 制标准曲线,从而求算样品的浓度。

实验参考因素

1.对于要检测的植物或动物来源的 DNA 样本,小牛胸腺 DNA(Calf thymus DNA )常常作为?#35889;?DNA 标样的参照物。     因为 Calf thymus DNA 具有双链结构、高度聚合,碱基分配均匀(AT 含量 58 %,GC 42 %)。如果检测样品的荧光     值超过了标准曲线,那么需要将样品做进一步稀释处理。为了保持结果的一致性,务必使每?#21672;?#26679;量均等,且不含有其   他高浓度的污染物。

2.WonderBlue? dsDNA 定 量 试 剂 盒 (WonderBlue? Broad Range dsDNA Quantitation Kits)可以测量范围在 2-2000   ng 的 dsDNA。对于一些不需要线性检测的样品,试剂盒检测 范围可以扩展至 4000 ng(见图 4)。如需检测更低含量的   样品,您可以将 DNA 标样用 1×TE 缓冲液作进一步的稀释,浓度 可以稀释到 0.2 ng/uL,?#32531;?#25353;照常规程序每孔     10 μL上样。

3.对于不同种类的检测仪器,您可以优化仪器设置,以获 取最佳线性度。一些可能会影响最终线性度和相对荧光强度 的   因素有?#28023;?)激发和发射波长与带宽;(2)截止型滤波器; (3)灵敏度设置;(4)移液的准确性;(5)微孔板制   造商。 

4. 表 2 详细列出了几种常见的 DNA 污染物,如盐、溶剂、洗涤剂和蛋白?#23454;取?/span>

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        图 2. 使用 WonderBlue? dsDNA 定量试剂盒检测不 同类型核酸得到的相对荧光强度。

                blob.png

                                                              dsDNA(ng /μL)

        图 3. 使用 WonderBlue? dsDNA 定量试剂盒?#35889;?#30340; calf thymus DNA 标准曲线(Ex/Em 350/460)。

                     blob.png

图 4. 分别使用 WonderBlue? dsDNA 定量试剂盒和 Quant-iT 定量试剂盒检测 calf thymus DNA 两?#26029;?#37322;液,酶标仪检测得到 的曲线图。上图显示 WonderBlue? dsDNA 定量试剂盒测得的 DNA 样本线性关系更好,且动态测量范围更广。表 

                                                表2. 常见的 DNA 污染物对 WonderBlue dsDNA 定量试剂盒的影响

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